Visualisation de thrombus cérébraux de souris à l’aide de l’imagerie par fluorescence dans le proche infrarouge

Résumé

Source : Kim, D. E., et al. Combinaison de l’imagerie fluorescente dans le proche infrarouge et de la micro-tomodensitométrie pour visualiser directement les thromboembolies cérébrales. J. Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo fait la démonstration de l’imagerie par fluorescence proche infrarouge (NIRF) pour visualiser les thrombus dans le tissu cérébral excisé marqué avec une sonde spécifique de la fibrine. La lumière proche infrarouge excite la sonde, provoquant la fluorescence du thrombus, ce qui permet de visualiser des thrombus à contraste élevé dans l’artère cérébrale principale et les petits vaisseaux sanguins corticaux.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Imagerie ex vivo par fluorescence proche infrarouge (NIRF) du tissu cérébral

1. Après la décapitation, retirez le cuir chevelu et coupez le crâne avec des ciseaux du foramen magnum vers la suture sagittale. Retirez la voûte crânienne en élevant soigneusement les bords du crâne incisé à l’aide de ciseaux tout en évitant de blesser le cerveau sous-jacent, mettant ainsi à nu les hémisphères.
2. Coupez les nerfs optiques de la base du cerveau aussi près que possible de la surface du cerveau, car ils pourraient se chevaucher avec le cercle des artères de Willis (COW) qui devraient être visualisées sur l’imagerie fluorescente dans le proche infrarouge (NIRF). Ensuite, pour visualiser la forme en Y de l’artère cérébrale moyenne (ACM) / de l’artère cérébrale antérieure (ACA) / de l’artère carotide interne distale (ICA) pour l’imagerie du thrombus NIRF, découpez les ICA distaux aussi loin que possible de la surface du cerveau après avoir comprimé doucement la base cérébelleuse pour exposer les points de coupe (Figure 1A).
3. Effectuer une imagerie NIRF (excitation/émission, 675 / 690 nm ; exposition de 1 seconde) du tissu cérébral retiré avec sa base pointant vers le haut (Figure 1B, C), ce qui permet de visualiser les thromboemboles marqués par fluorescence dans les artères de la vache (Figure 1D). Ensuite, effectuez une imagerie supplémentaire avec le sommet du cerveau pointant vers le haut, ce qui permet de visualiser les thromboembolis corticaux. Évitez d’assécher le cerveau en mettant quelques gouttes de solution saline sur le tissu.

Résultats

Figure 1 : Vue d’ensemble de l’imagerie par fluorescence proche infrarouge (NIRF) des thromboembolis cérébraux. (A et B) Un tissu cérébral représentatif a été retiré d’une souris ayant subi un AVC thromb...

Matériaux